人前列腺癌细胞VCAP培养说明书

一、细胞培养条件

细胞培养需要严格遵循无菌条件。最佳的细胞运输方式是将细胞培养到良好状态后，灌满完全培养液，并确保瓶口封闭。在收到细胞后，建议使用75%的酒精对细胞瓶进行喷洒消毒，然后在超净台下进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO₂培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，随后再进行处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数的拍照保存（推荐40x、100x和200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据；若未提供照片，默认收到状态良好。

二、细胞处理及传代步骤

a、细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，应将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，然后放入37℃、5% CO₂孵箱中继续培养；若细胞超过80%，即可进行传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其取回操作台，轻敲培养瓶，然后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例将细胞悬液进行分瓶传代（分别转入两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞收缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中并在1000RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，细胞沉淀后加入1ml无血清冻存液（商品号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱中。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再进行转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

三、注意事项

部分细胞在运输过程中可能因贴壁不牢而发生脱落，这属于正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清用于培养对比。沉淀后加入1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基进行重悬。之后按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml每瓶，放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中继续培养。

四、售后条款

AG百家乐提供优质的细胞售后服务：

1. 细胞问题的重发条件：如因运输造成的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，均可重发；如细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重发；常温发货后的细胞如复苏后24小时内大多数未存活（需提供真实的细胞状态照片），均可重发；若干冰冻存发货细胞复苏后24小时内未存活、或常温发货细胞未开封情况下出现污染，均可重发；细胞活性问题需在7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定后可重发；收到细胞当天及第2、3天请拍照，若3天未告知则视为产品合格。
2. 不予重发的情形：若因客户自身操作不当导致细胞污染、细胞状态不佳，或使用非推荐培养体系导致的细胞状态不良均不予重发；若未提供细胞培养前三天的照片，或细胞在收到后两天内未告知，也不予重发。

如有进一步问题，欢迎咨询AG百家乐客服，我们将竭诚为您服务。