AG百家乐为您提供的人B淋巴母细胞HMy2CIR培养指南，旨在帮助您在实验过程中确保细胞的健康与存活。以下是详细的细胞培养说明。

一、细胞培养条件

请确保在符合细胞培养标准的环境下进行操作，以维持HMy2CIR细胞的最佳生长状态。

二、细胞到货后的处理

收到细胞时，建议使用75%酒精对整个细胞瓶表面进行消毒，然后在超净工作台内进行无菌操作。接下来，将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态达到稳定。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄多个放大倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片为重要的售后依据。如未提供照片，默认为收到状态良好。

传代后，建议用原瓶的完全培养基培养一瓶，另外一瓶使用自己配制的完全培养基进行对照培养，并在换液后稍微松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基进行37℃、5% CO₂孵育；若细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否大部分变圆并脱落，若是，迅速轻敲培养瓶，并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱中，若需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，确保冻存管无结晶后，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中。
4. 次日，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会受到影响而脱落，若脱落较多，请将培养瓶内所有培养液收集至离心管并进行1000rpm离心5分钟。可收集上清进行过渡培养，沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打并消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，再次离心并重悬，按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

在细胞出现问题时，可重发的情况包括：运输过程中的细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液，细胞污染（需在48小时内提供真实结果），常温或干冰运输后细胞存活率低等情况。

不予重发的情况包括：客户造成的污染、错误操作导致细胞状态不佳、非推荐的培养体系、三天内未提供细胞状态照片等。

保持细胞健康是实验成功的关键，感谢您选择AG百家乐，我们致力于为您提供优质的细胞培养服务。