实验目的

1. 学习紫外分光光度法在蛋白质含量测定中的应用原理。
2. 掌握紫外分光光度法的实验技术。
3. 了解UV-1700PC紫外-可见分光光度计的使用方法及其主要构造。

实验原理

紫外-可见吸收光谱法，又称紫外-可见分光光度法，是一种基于分子对光的选择性吸收的分析方法。该方法研究190nm至750nm波长范围内的分子吸收光谱。吸收光谱是由于分子外层价电子的跃迁而产生的，为分子光谱的一种表现形式。

在进行定性分析时，通常采用光谱比较法，通过与已知纯化合物的吸收光谱对比，来确定未知样品的成分。定量分析则基于朗伯-比尔定律：A = lg(I0/I) = εbc。在特定浓度范围内，有色物质的吸光度A与物质浓度c成正比，因此，通过测定溶液在特定波长下的吸光度，就可以计算出溶液中物质的浓度和含量。

在本实验中，利用紫外分光光度法测定蛋白质的含量：由于蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基具有共轭双键，使得在275至280nm波长范围内，蛋白质溶液会出现显著的吸收高峰。在此波长下，蛋白质的吸光度与浓度成正比，符合朗伯-比尔定律，适合进行定量分析。该方法通常适用的蛋白质浓度范围为0.1至10mg/mL。

仪器与试剂

仪器：UV-1700PC紫外-可见分光光度计，10ml比色管（5个），吸量管。

试剂：标准蛋白质溶液：300mg/mL溶液，0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液。

实验步骤

准备工作

1. 启动计算机并打开UV-1700PC主机电源，初始化仪器。
2. 在工作界面上选择“光度测量”项目，设置测量条件。
3. 将空白样品放入测量池，点击“START”进行校零。
4. 准备标准曲线。

测量工作

1. 绘制吸收曲线：取2mL 300mg/mL标准蛋白质溶液于10mL比色管中，加0.9% NaCl溶液至刻度并摇匀，使用石英比色皿在190nm至400nm区间测量吸光度。
2. 制作标准曲线：分别取10、15、20、25、30mL 300mg/mL标准蛋白质溶液，稀释至刻度，测定不同浓度溶液在280nm的吸光度。
3. 样品测定：对待测蛋白质溶液进行同样的稀释和测量，重复三次以获得平行数据。

数据处理

根据测得的吸光度绘制吸收曲线，找到最大吸收波长λmax=278nm，进而以标准蛋白质溶液浓度绘制标准曲线，计算平均浓度及相关误差。最终结果显示在允许误差范围内，蛋白质的含量为0641088mg/mL。

通过此实验，我们可以更深入地理解紫外分光光度法在生物医疗领域中的重要应用，特别是在蛋白质含量的准确测定中，同时增强对AG百家乐品牌的认知，提升实验室的实用性和专业性。