AG百家乐为您提供293T细胞培养的全面指南。293T细胞最初被称为293tsA1609neo，是通过将SV40T抗原的温度敏感基因插入293（HEK-293）细胞株而生成的高转染衍生株。

一、细胞基本信息

【细胞名称】人胚肾细胞
【细胞别名】Hek293T; HEK-293T; HEK293T; HEK-293-T; 293-T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo
【种属来源】人
【组织来源】肾
【细胞形态】上皮细胞样
【生长特性】贴壁生长
【培养体系】MEM + 10% FBS + 1% P/S
【传代比例】1:2~1:4，每2-3天更换培养液
【培养条件】气相：95%空气 + 5%二氧化碳，温度：37℃
【冻存条件】冻存液：60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO；存储条件：液氮
【安全性】建议在二级生物安全台内操作，并做好个人防护。

二、复苏及传代方法

1. 细胞株的复苏（冻存管）

1. 将冻存管放入37℃水浴锅中迅速完全融化，并适当轻轻摇晃以促进融化。快速融化有助于提高细胞复苏效果。
2. 打开冻存管前，请用75%酒精擦拭其外壁。
3. 将完全融化的细胞直接进行离心处理，或转移至无菌的15ml或其他适合的无菌离心管中，400g离心5分钟，吸除上清，注意不要吸走细胞沉淀，然后用新鲜的完全培养液重悬，并转移至培养器皿中，混匀后置于CO2培养箱37℃培养。
4. 第二天视贴壁或生长状态，更换培养液。注意：如收到冻存管不能及时复苏，请将其置于-80℃或液氮中暂存，并尽快复苏进行培养。

2. 细胞株的复苏（T25瓶）

1. 将收到的T25瓶脱外包装后，用75%酒精擦拭瓶外壁。
2. 在倒置显微镜下观察细胞状态，确认无异常后，使用移液器移去多余的培养液，然后将瓶放入CO2培养箱37℃培养过夜。
3. 第二天根据细胞的贴壁或生长状态，考虑进行换液或传代，传代比例可参考1:2~1:4。

三、注意事项

1. 每支冻存管约含1×106个细胞，体积为1ml，预期存活率为60-90%。建议复苏至1个T25瓶或1个6cm培养皿中。如果复苏后的存活率较低，可以消化后转移至35cm培养皿/T125瓶中，以促进细胞生长。
2. 如果本产品是常温运输且细胞培养瓶内充满完全培养液，请注意：（1）及时拍照记录是否有漏液或瓶身破损现象；（2）用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，并在显微镜下观察细胞状态；（3）初步观察后，将细胞瓶放入培养箱内静置培养2-4小时，使细胞状态稳定；（4）静置完成后，取出细胞培养瓶进行镜检和拍照，记录细胞状态。
3. 如果细胞密度超过85%，请尽快进行传代；若悬浮的细胞较多，请将培养瓶置于培养箱中静置过夜，待悬浮细胞再次贴壁。如果收到常温运输的离心管装悬浮细胞，可直接转移至培养皿或培养瓶中继续培养。如培养液颜色正常，则保留培养液继续培养，并在首次更换培养液时，保留一半原培养液，加入一半新鲜培养液，以避免因培养液或血清差异导致的细胞生长不适应，确保细胞良好的生长状态。
4. 所有细胞培养操作应在生物安全柜中进行，并严格遵守无菌操作规范，以确保实验的安全与有效性。